Permet la mise en évidence de 3 enzymes :
- l’uréase
- la tryptophane désaminase (TDA)
- la tryptophanase : hydrolyse le tryptophane en indole
Ce milieu contient des substrats (L-tryptophane et urée) et un indicateur coloré (rouge de phénol). L’ajout de réactif de Kovacs et de perchlorure de fer permet de détecter repectivement la présence de tryptophanase et de tryptophane désaminase.
Réalisation
Réaliser une suspension bactérienne dans le milieu et
incuber à 37°C.
La lecture peut être réalisée jusqu’à 24H (une suspension
dense permet une lecture rapide <3H)
L’hydrolyse de l’urée par l’uréase libère de
l’ammoniaque qui alcalinise le milieu et fait virer l’indicateur coloré du
jaune au rouge
La tryptophanase hydrolyse le tryptophane en indole qui
réagit avec le réactif de Kovacs (jaune) et forme un anneau rouge
La tryptophane désaminase catalyse la transformation du
tryptophane en acide indole pyruvique qui donne un composé marron avec du
perchlorure de fer (jaune).